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Development and Validation of a Competitive Enzyme-Linked Immunosorbent Assay for Detection of Type A Influenza Antibodies in Avian Sera

A. L. Shafer, J. B. Katz and K. A. Eernisse
Avian Diseases
Vol. 42, No. 1 (Jan. - Mar., 1998), pp. 28-34
DOI: 10.2307/1592573
Stable URL: http://www.jstor.org/stable/1592573
Page Count: 7
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Development and Validation of a Competitive Enzyme-Linked Immunosorbent Assay for Detection of Type A Influenza Antibodies in Avian Sera
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Abstract

Serologic screening of avian sera for group-specific antibodies to type A influenza is currently accomplished by using the avian influenza (AI) agar gel immunodiffusion (AGID) test. A competitive enzyme-linked immunosorbent assay (CELISA) was developed using a baculovirus vector, Autographa californica nuclear polyhedrosis virus, expressing the nucleoprotein (NP) gene of A/Ann Arbor/6/60 influenza virus. The recombinant NP was obtained by inoculation of Spodoptera frugiperda (Sf9) insect cells or Trichoplusia ni insect larvae with the recombinant baculovirus. A hybridoma cell line producing monoclonal antibody against influenza virus A nucleoprotein was used to generate mouse ascitic fluid for the CELISA. The nucleoprotein and the monoclonal antibody were used without further purification in a CELISA for detection of avian-origin serum antibodies to type A influenza. The AI AGID and CELISA tests were compared for sensitivity and specificity using 1651 experimental and reference antisera. Samples discrepant in AGID and CELISA test results were further evaluated by the AI indirect fluorescent antibody (IFA), hemagglutination-inhibition (HI), and neuraminidase-inhibition (NI) tests. The results demonstrated a high degree of correlation between the AGID and CELISA test results, with the IFA, HI, and NI tests offering additional support of CELISA test specificity. The CELISA is a rapid, economical, sensitive, and specific serodiagnostic method for screening large numbers of avian sera for antibodies to avian influenza virus. /// La evaluación de suero aviar para la presencia de anticuerpos específicos de grupo contra el virus de influenza tipo A se realiza actualmente utilizando la prueba de inmunodifusión en agar. Se desarrolló un inmunoensayo competitivo con enzimas asociadas (CELISA) utilizando como vector el virus Autographa californica, un baculovirus de la poliedrosis nuclear, expresando el gen de la nucleoproteína (NP) del virus A/Ann Arbor/6/60 de influenza aviar. La nucleoproteína recombinante fue obtenida por medio de la inoculación de células de insecto Spodoptera frugiperda (SF9) ó células de larvas de insecto Trichoplusia ni con el baculovirus recombinante. Para la producción del fluido ascítico de ratón para la prueba CELISA se utilizó una línea de células de hibridoma productora de anticuerpos monoclonales contra la nucleoproteína del virus de influenza tipo A. En esta prueba CELISA para la detección de anticuerpos séricos de origen aviar contra el virus de influenza tipo A, la nucleoproteína y los anticuerpos monoclonales se utilizaron sin mayor purificación. La prueba de inmunodifusión en agar y la prueba CELISA fueron comparadas por su sensibilidad y especificidad utilizando 1651 muestras de antisuero experimentales y de referencia. Las muestras cuyos resultados fueron diferentes en la prueba de inmunodifusión en agar y la prueba CELISA se sometieron a mayor evaluación por medio de la prueba de inmunofluorescencia indirecta, la prueba de inhibición de la hemoaglutinación y la prueba de inhibición de la neuraminidasa. Se observó un alto grado de correlación entre los resultados obtenidos con las pruebas de inmunodifusión en agar y la prueba CELISA y los resultados obtenidos con la prueba indirecta de inmunofluorescencia, la prueba de inhibición de la hemoaglutinación y la prueba de inhibición de la neuraminidasa, confirmándose aún más la especificidad de la prueba CELISA. La prueba CELISA es un método de diagnóstico rápido, económico y sensible para evaluar cantidades grandes de muestras de suero aviar para anticuerpos contra el virus de influenza aviar.

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