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Reticuloendotheliosis Virus (REV) Long Terminal Repeats Incorporated in the Genomes of Commercial Fowl Poxvirus Vaccines and Pigeon Poxviruses without Indication of the Presence of Infectious REV

Kristi M. Moore, Jennifer R. Davis, Takanori Sato and Atsushi Yasuda
Avian Diseases
Vol. 44, No. 4 (Oct. - Dec., 2000), pp. 827-841
DOI: 10.2307/1593055
Stable URL: http://www.jstor.org/stable/1593055
Page Count: 15
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Reticuloendotheliosis Virus (REV) Long Terminal Repeats Incorporated in the Genomes of Commercial Fowl Poxvirus Vaccines and Pigeon Poxviruses without Indication of the Presence of Infectious REV
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Abstract

Because of reticuloendotheliosis virus (REV) contamination in commercial poultry vaccines, polymerase chain reaction (PCR) assays have been described to increase the sensitivity of biological assays used to detect REV in vaccines. The PCR assay designed to amplify the long terminal repeat (LTR) region of REV identified REV LTRs in many of the commercial fowl poxvirus (FPV) vaccines evaluated. These commerical vaccines were not thought to be contaminated with replicating REV because of the lack of REV outbreaks, the lack of in vitro amplification, and lack of a serologic response to REV. As previously described, the FPV S vaccine strain is known to carry infectious integrated proviral REV, whereas FPV M vaccine strain and its derivatives carry integrated LTRs or remnants of REV proviral DNA inserted into the FPV genome. Another PCR assay designed to amplify the envelope gene of REV was used to verify that the envelope proviral gene was not present in REV LTR PCR-positive samples. Southern blot analysis with REV LTR probes hybridized to the 9-kb EcoRI genomic fragment of all FPV and pigeon poxviruses evaluated, whereas the envelope probe did not hybridize to any poxvirus genome. Sequence analysis of the 9-kb EcoRI fragment indicated that an integrated REV LTR exists in the 9-kb EcoRI of some poxvirus genomes. A new PCR assay designed to amplify integrated REV LTRs in the 9-kb EcoRI fragment identified complete and incomplete integrated REV LTRs in all FPV and pigeon poxvirus genomes evaluated. /// Debido a la contaminación por el virus de reticuloendoteliosis de vacunas comerciales, se han descrito pruebas de la reacción en cadena por la polimerasa (de las siglas en inglés PCR) que aumentan la sensibilidad de las pruebas biológicas utilizadas para detectar el virus de reticuloendoteliosis en las vacunas. La prueba PCR diseñada para amplificar las secuencias largas terminales repetidas del virus de reticuloendoteliosis identificó estas regiones repetitivas en muchas de las vacunas comerciales de viruela aviar evaluadas. No se cree que estas vacunas comerciales hayan estado contaminadas con el virus de reticuloendoteliosis con capacidad de replicarse debido a que no se presentaron brotes de la enfermedad, no hubo amplificación viral in vitro y no hubo respuesta serológica contra el virus de reticuloendoteliosis. Se ha descrito previamente que la cepa vacunal S del virus de viruela aviar contiene la forma proviral integrada infecciosa del virus de reticuloendoteliosis, mientras que la cepa vacunal M del virus de viruela aviar y sus derivados contienen secuencias largas terminales repetidas ó remanentes del DNA proviral del virus de reticuloendoteliosis insertadas en el genoma del virus de viruela aviar. Se diseñó otra prueba de PCR para amplificar el gen de la cubierta del virus de reticuloendoteliosis y se utilizó para verificar que el gen de la cubierta proviral no estuviera presente en las muestras positivas por PCR a las secuencias largas terminales repetidas del virus de reticuloendoteliosis. El análìsis de inmunotransferencia puntual Southern con sondas para estas secuencias del virus de reticuloendoteliosis mostró hibridación a un fragmento genómico EcoRI de 9-kb en todos los virus de viruela aviar y viruela de paloma evaluados, mientras que la sonda de la cubierta no mostró hìbridación a los genomas de ninguno de los virus de viruela aviar. El análisis de la secuencia del fragmento EcoRI de 9-kb indicó que existe un fragmento de secuencias largas terminales repetidas integradas del virus de reticuloendoteliosis en el fragmento EcoRI de 9-kb de algunos genomas virales de viruela aviar. Una nueva prueba de PCR diseñada para amplificar secuencias largas terminales repetidas integradas del virus de reticuloendoteliosis en el fragmento EcoRI de 9-kb identificó secuencias largas terminales repetidas completas e incompletas en todos los genomas virales de viruela aviar y viruela de paloma evaluados.

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